新製品 - 急速凍結IHC溶液

2023-12-08

セルノフテ

Celnovte社は、改良された固定液処方と最適化された組織固定法を特徴とする、先進的なFast Frozen Kitを提供できることを誇りに思っています。この技術革新により、パラフィン包埋組織との凍結組織形態の一貫性が確保され、構造を損なうことなく組織の完全性が保持されます。その結果、組織の形態が改善され、より鮮明で明瞭な染色が可能となり、病理医が結果を解釈する際の貴重な助けとなります。

セクション1：組織切片の準備

適切な大きさの新鮮な組織サンプルを用意し、適量のOTC包埋培地を入れた支持体上に組織塊を置く。温度制御されたクライオスタット（一般に-21℃～-26℃）で組織を急速凍結した後、凍結した組織ブロックを厚さ約5μmの薄切りにする。組織スライスをブロックの上に少し残しておき、ラベルを貼った室温のスライドガラスを組織の上にそっと押し付け、組織がスライドガラスの上に素早く溶けるようにする。

注: 組織によって最適凍結温度は異なる。

セクション2：染色プロセス

2.1 凍結切片組織の固定

接着した凍結組織スライドを直ちに固定液に入れ、30秒から1分間固定する。注: 最適な染色結果を得るためには、Sanotec 社が提供する固定液を使用する。他のメーカーの固定液は、使用前に病理技師が有効性を確認する必要がある*。

2.2 固定後のリンス

固定後、スライドを取り出し、水道水の中で軽く振り、スライドから固定液とOTC包埋液を完全に取り除く。注: 組織の剥離を防ぐため、やさしくすすぐ。

2.3 ブロッキング

残存する固定液と包埋液を除去した後、免疫組織化学ペンを用いて被検組織の領域を描出する。適量のブロッキング試薬を加え、20秒間インキュベートする。その後、TBS洗浄液で30秒間スライドを洗浄する。

2.4 一次抗体を加える

スライドから余分な洗浄液を取り除き、Sanotec凍結免疫組織化学特異的一次抗体試薬を適量、描画した領域内に加え、2～4分間インキュベートする。TBS洗浄液でスライドを30秒間洗浄する。注: 使用前に抗体が室温にあることを確認してください。抗体のインキュベーション温度を上げると染色性が向上します。

2.5 二次抗体を加える

スライドから余分な洗浄液を取り除き、Sanotec凍結免疫組織化学特異的二次抗体試薬を適量、描画した領域内に加え、2-3分間インキュベートする。TBS洗浄液でスライドを30秒間洗浄する。注: 非特異的なバックグラウンド染色を避けるため、洗浄時間を過度に短くしないこと。

2.6 DABの追加

スライドから余分な洗浄液を取り除き、適量のDAB発色液を描画範囲に加え、約90秒間インキュベートする。その後、純水で30秒間すすぐ。注: 使用前にDAB溶液を新たに調製する。調製したDAB溶液の有効期間は、室温（25℃）で6時間、4℃で12時間である。

2.7 ヘマトキシリンによるカウンター染色

適量のヘマトキシリン対染色液を加え、約10秒間インキュベートした後、純水で30秒間すすぐ。注: 本キットの対比染色液は強い染色力を持っています。特に核染色では、長時間のカウンターステインティングは陽性結果の解釈に影響することがありますので、カウンターステインティングの時間を延長しすぎないようにしてください。