MicroStacker™ Polymer Detection System Universalは、免疫組織化学(IHC)法において、ホルマリン固定パラフィン包埋(FFPE)組織上のマウスおよびウサギの一次抗体を検出するための、ビオチンを含まないポリマー性西洋ワサビペルオキシダーゼ(HRP)-二次抗体コンジュゲートシステムです。革新的なMicroStacker™技術により、マイクロポリマースカフォールド上に抗体とペルオキシダーゼ酵素を層状に積み重ねることができます。この技術により、すべての細胞コンパートメントに容易に浸透するコンパクトなポリマー構造が得られ、かさばるデキストラン骨格を持つ他の従来のHRPポリマーと比較して優れた感度が得られる。さらに、このシステムはIgG全体の代わりにIgG二次抗体のF(ab')フラグメントを利用するため、内因性FcレセプターへのIgG全体の非特異的結合によるバックグラウンドを回避することができる。マウス/ラット血清の交差吸着後、MicroStacker™ Rabbit-on-Rodent HRP-polymer 検出キットは内因性免疫グロブリンによる非特異的染色を大幅に減少させることができます。本キットは主にマウス/ラット組織上のウサギモノクローナル抗体/ウサギポリクローナル抗体の染色に使用されます。
デパラフィネーション スライドをキシレンで脱パラフィンする。段階的なアルコールから水にスライドを移す。
ペルオキシダーゼ・ブロック ペルオキシダーゼブロック試薬で5分間ブロックする。洗浄バッファーで5分間ずつ2回洗浄する。
抗原回収プロトコル: 推奨される抗原回収プロトコールについては、それぞれの一次抗体のデータシートをご参照ください。
一次抗体: すぐに使用できる一次抗体を2滴(100ul)または必要量、検体を覆うように塗布する。RT で 30~60 分インキュベートする。洗浄バッファーで5分間ずつ2回洗浄する。
検出ポリマー: 検体を覆うように抗マウス/ウサギ HRP ポリマーを 2 滴(100ul)または必要なだけ滴下する。RTで30分間インキュベートする。洗浄バッファーで5分間ずつ2回洗浄する。
DAB発色剤: すぐに使えるDAB基質溶液を準備する。DAB 基質バッファーに DAB 発色剤を加え、2 つの溶液を 1:20 の割合で混合します。一般的には、100ulの既製基質溶液でスライド1枚分の染色が可能です。
すぐに使える基質溶液で5分間インキュベートする。脱イオン水でスライドをすすぐ。
反対票: ヘマトキシリンでカウンターステインする。脱イオン水でスライドをすすぐ。
データレビュー:並べて比較
染色手順:
一次抗体のインキュベーションRT、60分
二次抗体インキュベーション:RT、30分
DABインキュベーション:5分
検出ポリマーの比較:
マイクロスタッカーTM ラビットオンローデントHRP-ポリマー検出キット
ラビットオンロデントHRPポリマー(アメリカンリサーチマーケット)
実験結果:
マウス肝臓(FAHウサギモノクローナル抗体)
ラビットオンローデントHRPポリマー
マイクロスタッカーTM ラビット・オン・マウス
コード |
製品名 |
コンポーネント |
仕様 |
RS3000 |
マイクロスタッカーTM ラビットオンローデントHRP-ポリマー検出キット(3コンポーネント) |
マイクロスタッカーTM 抗ウサギHRPポリマー |
100ml (1000T) |
20*DABクロモゲン |
5ミリリットル |
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DAB基質バッファー |
100ミリリットル |
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マイクロスタッカーTM 抗ウサギHRPポリマー |
30ml (300T) |
||
20*DABクロモゲン |
1.5ml |
||
DAB基質バッファー |
30ミリリットル |
||
マイクロスタッカーTM 抗ウサギHRPポリマー |
20ml (200T) |
||
20*DABクロモゲン |
1ml |
||
DAB基質バッファー |
20ミリリットル |
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RS3001 |
マイクロスタッカーTM ラビットオンローデントHRP-ポリマー検出キット(4成分) |
ペルオキシダーゼ阻害試薬 |
100ミリリットル |
マイクロスタッカーTM 抗ウサギHRPポリマー |
100ml (1000T) |
||
20*DABクロモゲン |
5ミリリットル |
||
DAB基質バッファー |
100ミリリットル |
||
ペルオキシダーゼ阻害試薬 |
20ミリリットル |
||
マイクロスタッカーTM 抗ウサギHRPポリマー |
20ml (200T) |
||
20*DABクロモゲン |
1ml |
||
DAB基質バッファー |
20ミリリットル |
||
RS3002 |
マイクロスタッカーTM ラビットオンローデントHRP-ポリマー検出キット(5成分) |
ペルオキシダーゼ阻害試薬 |
100ミリリットル |
マイクロスタッカーTM 抗マウス/ウサギ HRP-ポリマー |
100ml (1000T) |
||
20*DABクロモゲン |
5ミリリットル |
||
DAB基質バッファー |
100ミリリットル |
||
ヘマトキシリン |
100ミリリットル |
||
ペルオキシダーゼ阻害試薬 |
20ミリリットル |
||
マイクロスタッカーTM 抗マウス/ウサギ HRP-ポリマー |
20ml (200T) |
||
20*DABクロモゲン |
1ml |
||
DAB基質バッファー |
20ミリリットル |
||
ヘマトキシリン |
20ミリリットル |