Inmunohistoquímica multiplex: Técnicas cromogénicas frente a técnicas fluorescentes

La inmunohistoquímica multiplex (mIHC) es una potente herramienta en los estudios médicos. Permite a los científicos ver muchos marcadores en una sola pieza de tejido. Este método es clave para explorar procesos corporales complejos, como los entornos del cáncer, las acciones de las células inmunitarias y el crecimiento de enfermedades. Hay dos formas principales de detección de mIHC: mIHC cromogénica y mIHC fluorescente. Cada uno de ellos tiene puntos fuertes y débiles que los hacen adecuados para determinados casos. Este blog se sumerge en estos métodos y compara sus usos, ventajas y dificultades. Ayuda a los investigadores a elegir el mejor enfoque para su trabajo.

Qué es la inmunohistoquímica multiplex

La inmunohistoquímica multiplex permite detectar varios marcadores proteínicos a la vez en un corte de tejido. Ahorra muestras valiosas. También muestra cómo se relacionan los marcadores en el espacio. A diferencia de la antigua IHC singleplex, que marca una cosa por portaobjetos, la mIHC proporciona más datos. Por eso es ideal para la investigación, los análisis clínicos y los estudios sobre el cáncer.

La elección entre mIHC cromogénica y mIHC fluorescente depende de los objetivos del estudio, las herramientas disponibles, el tipo de muestra y la necesidad de obtener resultados numéricos o cualitativos. A continuación, exploramos los detalles de cada método y mostramos sus pros y sus contras en casos reales.

MIHC cromogénica: principios y aplicaciones

Cómo funciona la mIHC cromogénica

La mIHC cromogénica utiliza reacciones enzimáticas. Estas suelen implicar peroxidasa de rábano picante (HRP) o fosfatasa alcalina (AP). Activan depósitos coloreados en el punto marcador. Estos depósitos, como la 3,3'-diaminobencidina (DAB) o los cromógenos transparentes, aparecen en un microscopio óptico normal. Los métodos mejorados, como la amplificación de la señal de tiramida (TSA), aumentan la sensibilidad. Ayudan a encontrar proteínas de baja cantidad.

Ventajas de la mIHC cromogénica

• Asequible y fácil de usar: La mIHC cromogénica funciona con microscopios de campo claro estándar. Estos son habituales en los laboratorios, por lo que no se necesitan herramientas especiales.
• Marcas duraderas: Los depósitos coloreados permanecen estables. Los portaobjetos pueden conservarse durante años sin perder claridad, a diferencia de los tintes fluorescentes que se decoloran.
• Proceso familiar: La mIHC cromogénica se adapta a las rutinas habituales de laboratorio. Esto facilita su uso en entornos médicos.
• Vista de tejido transparente: La tinción con hematoxilina muestra bien la estructura del tejido. Ayuda a evaluar la forma.

Limitaciones de la mIHC cromogénica

• Pocos marcadores a la vez: Los cromógenos tienen amplias gamas de colores. Solo 3-5 marcadores pueden verse claramente sin mezclarse.
• Análisis numérico básico: La intensidad del cromógeno no es muy exacta. Esto hace que el recuento preciso sea más difícil que con los métodos fluorescentes.
• Mezcla de colores: Las marcas cromógenas superpuestas pueden mezclarse. Esto dificulta el estudio de las marcas en el mismo punto.

Los mejores escenarios para la mIHC cromogénica

La mIHC cromogénica brilla en las pruebas médicas en las que son frecuentes los tejidos conservados. También es buena para análisis rápidos y económicos. Por ejemplo, en pruebas de cáncer de pulmón, mIHC cromogénica (por ejemplo, TTF1, p40, PD-L1, CD8) pueden mostrar tipos de tumores y marcadores clave en un solo portaobjetos. Esto ahorra tejido para otras pruebas.

MIHC fluorescente: principios y aplicaciones

Cómo funciona la mIHC fluorescente

La mIHC fluorescente utiliza etiquetas luminosas unidas a anticuerpos o TSA. Estas etiquetas brillan con longitudes de onda de luz específicas cuando se activan. Las imágenes multiespectrales y la separación de señales detectan varias etiquetas luminosas, aunque sus señales se solapen. Este método requiere microscopios de fluorescencia o escáneres de portaobjetos con los filtros adecuados.

Ventajas de la mIHC fluorescente

• Muchos marcadores a la vez: La mIHC fluorescente puede detectar entre 5 y 10 marcadores en un solo portaobjetos. Es perfecta para estudios complejos como el mapeo inmunológico del cáncer.
• Análisis de números exactos: Las etiquetas luminosas proporcionan un rango de señal amplio y constante. Esto permite un recuento preciso de los niveles de proteína a nivel celular.
• Estudio de solapamiento de mejores marcadores: La separación de señales evita que se mezclen. Esto hace que mIHC fluorescenteideal para estudiar proteínas en la misma zona celular.
• Mayor sensibilidad con la TSA: La TSA potencia las señales luminosas. Localiza con claridad los objetivos de baja cantidad.

Limitaciones de la mIHC fluorescente

• Herramientas costosas: La mIHC fluorescente requiere microscopios de fluorescencia especiales o sistemas multiespectrales. Estos pueden ser caros.
• Señales difusas: Las etiquetas brillantes pierden fuerza con el tiempo. Es necesario almacenarlas y crear imágenes con cuidado.
• Cuestiones de brillo natural: Los tejidos conservados, como el bazo o el riñón, pueden brillar por sí solos. Esto puede confundir las señales. Las imágenes multiespectrales ayudan, pero son complejas.

Los mejores escenarios para mIHC fluorescente

La mIHC fluorescente es la mejor para investigaciones que necesitan muchos marcadores y recuentos exactos. Es ideal para estudiar la configuración inmunitaria del cáncer. Por ejemplo, en trabajos sobre cáncer de mama, mIHC fluorescente puede cartografiar células T CD8+, células TFH y células B en estructuras linfoides. Esto muestra vínculos espaciales vitales para el éxito de la inmunoterapia.

Comparación de mIHC cromogénica y fluorescente: guía práctica

Para ayudar a los investigadores a elegir entre mIHC cromogénica y mIHC fluorescenteEste cuadro resume las principales diferencias:

Cuándo elegir mIHC cromogénica

• Análisis de rutina: Se adapta a los procesos de laboratorio existentes con herramientas estándar.
• Presupuesto ajustado: Es bueno para laboratorios sin herramientas de fluorescencia.
• Almacenamiento prolongado: Las diapositivas permanecen despejadas sin pérdida de señal.

Cuándo elegir mIHC fluorescente

• Estudios complejos: Se adapta a trabajos que necesitan muchos marcadores y análisis a nivel celular.
• Estudios de solapamiento: Es ideal para datos exactos de co-localización de marcadores.
• Número Necesidades: Proporciona recuentos de marcadores precisos para la investigación.

Celnovte: Su proveedor de mIHC de confianza

Celnovte es un proveedor líder para los investigadores que buscan herramientas de mIHC de alta calidad. Celnovte se centra en suministros avanzados de IHC y mIHC. Ofrecen artículos como el Kit inmunohistoquímico multiplex (mIHC) y Reactivo inmunocromogénico doble tinción I. Sus reactivos de vanguardia, incluidos los sistemas cromogénicos y fluorescentes basados en TSA, ofrecen resultados claros y fiables. Con un enfoque en la calidad y las nuevas ideas, Celnovte ayuda a los investigadores a lograr resultados de mIHC precisos y repetibles. Celnovte es un socio de confianza para mIHC cromogénica y mIHC fluorescente trabajo, Página de Celnovte.

Preguntas más frecuentes sobre mIHC cromogénica y fluorescente

Q1. ¿Cuál es la diferencia clave entre mIHC cromogénica y mIHC fluorescente?

A1. Cromogénico mIHC utiliza depósitos de color a base de enzimas. Se muestran bajo microscopios de campo claro. En contraste, mIHC fluorescente utiliza etiquetas brillantes que se ven con microscopios de fluorescencia. La cromogénica es más duradera y barata. El fluorescente ofrece más marcadores y recuentos exactos.

Q2. ¿Cuántos marcadores puede detectar la mIHC cromogénica en comparación con la mIHC fluorescente?

A2. Cromogénico mIHC por lo general manchas 3-5 marcadores. La superposición de colores lo limita. Sin embargo, mIHC fluorescente puede detectar entre 5 y 10 o más. La separación de señales y las imágenes multiespectrales lo hacen posible.

Q3. ¿Es buena la mIHC fluorescente para tejidos preservados?

A3. Sí, mIHC fluorescente funciona bien para los tejidos preservados. Pero el brillo natural puede ser un problema. Las imágenes multiespectrales y la separación de señales reducen este problema. Garantizan resultados claros.

Q4. ¿Qué método es mejor para los estudios de solapamiento de marcadores?

A4. MIHC fluorescente es mejor para los estudios de solapamiento. Separa claramente las señales mezcladas. Esto lo hace ideal para estudiar proteínas en la misma mancha celular.

Lleve su investigación sobre mIHC al siguiente nivel

Tanto si se trata de pruebas médicas rutinarias como de investigación avanzada sobre el cáncer, la elección del método mIHC adecuado es importante. Cromogénico mIHC es fácil de usar y estable. MIHC fluorescente ofrece recuentos de marcadores inigualables y datos exactos. Eche un vistazo a las herramientas mIHC de Celnovte, como el Reactivo inmunocromogénico doble tinción II. ¿Listo para mejorar tus estudios? Contactar con Celnovte hoy mismo para explorar sus necesidades de mIHC y liberar todo el potencial de sus muestras de tejido.